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OD600的應用

OD600是指在600nm波長處的吸光度，常常被用于表示細菌液體培養(yǎng)液中的細菌濃度。在細菌連續(xù)培養(yǎng)過程中，在不同的時間點檢測菌液的OD600值，然后以時間為橫坐標，OD600為縱坐標，描繪細菌的生長曲線。結合生長曲線，可以評估細菌所處的生長階段，進而可以確定合適的誘導表達或收獲的時間點。

圖1 大腸桿菌生長曲線

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OD600的檢測原理

菌液是一種非均相的懸濁液，當入射光照射在菌液上時，光線被細菌（菌體）所散射，所以儀器檢測到的“吸光度”實際上是由散射和吸收綜合作用產生的，而不是如均相溶液中一般是由于溶質分子光吸收引起的。

當使用不同型號的設備來檢測同一樣本的吸光度時，可能會得到不同的OD600，這與儀器的光路設計有關。儀器的檢測器與樣本之間的距離（d）和檢測器的大小（R）都會對吸光度產生影響。如圖2所示，當檢測器位于d1時，散射光可以被檢測器接收到，此時吸光度較小，而當檢測器位于d2時，光不能被檢測器接收到，此時吸光度較大。

圖2 菌液光散射的示意圖（Stevenson et.al,2016）

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使用不同的設備檢測OD600

不同設備檢測到的OD600不能直接比較。如圖3所示，使用5個型號的設備（Biomat3，ND 2000 A，ND 2000 B，Genesys，Beckman DU530）分別對不同稀釋倍數（X1，X2，X5，X10）的樣本進行OD600檢測。結果顯示不同的設備對同一樣本的OD600檢測值不一樣。如果需要比較不同設備間的OD600值，需要先確定相同樣品在不同設備上檢測得到的吸光度值之間的恒定偏差或者比率，然后進行校準。

圖3 不同型號的儀器OD600檢測結果（Stevenson et.al,2016）

因此當進行細菌菌株篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化、添加劑評估等需要比較微生物生長曲線的研究工作時，最好選擇同一型號的設備進行實驗，保證實驗條件的一致性。

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