【左側】：電動勻漿機^*、臺式離心機、盛有冰的容器（不帶蓋）、玻璃平皿^**、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管、1ml勻漿瓶、無菌手術刀^*、無菌手術鑷^*、計時器

           （^*鼠標箭頭放上：說明框顯示：“DEPC水處理過”，3秒鐘后消失；

^**鼠標箭頭放上：說明框顯示：“所有玻璃器皿先用酸處理，沖洗干凈，高壓消毒”，3秒鐘后消失）

   【右側】：待提取組織（肝臟）、DEPC水^*、異丙醇、氯仿、75%冰乙醇

            (^*鼠標箭頭放上：一秒鐘后“實驗注意”顯示：1%焦碳酸二乙酯：去除外源性RNA酶)

   【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣

            （鼠標箭頭放上：一秒鐘后“實驗注意”顯示：DEPC水處理過）

   【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標記）

   【界面按鈕設計】：實驗注意：有內容時自動顯示

                    實驗提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示

                     重新操作：返回到上一步結束

退出實驗：回到本步驟界面

退出運行：回到首頁

關閉音樂：實驗開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關閉音樂

1、工作臺中央的盛冰的容器---容器中放有和容器口齊平的碎冰。

   實驗提示：按順序選擇玻璃平皿、肝臟組織、手術刀，切碎標本。

 

2、切碎標本 ------ 選擇玻璃平皿放置于盛冰容器中央，拖動肝臟組織放置于玻璃平皿中（鼠標箭頭放置于肝臟上時，說明框顯示：0.1g小鼠肝臟，3秒鐘后隱去）。點擊無菌手術刀，拖動手術刀至肝臟組織上（該動作完成后，自動出現說明框：切碎肝臟組織，同時手術刀上下做切碎動作，三秒鐘后動作停止，手術刀回到原位）。

   實驗提示：使用無菌鑷子，將肝臟組織放入1ml勻漿瓶內。

 

3、移動1ml 勻漿瓶----點擊勻漿瓶，并拖動至工作臺中央的冰盒內；點擊無菌鑷子，鼠標變為鑷子形狀，將玻璃平皿上的切碎組織夾入勻漿瓶內（該動作完成后，玻璃平皿及無菌鑷子回到工作臺界面原位）

     實驗提示：點擊微量吸液器，點擊裝有槍頭的塑料盒，盒打開。微量吸液器裝上槍頭，拖動微量吸液器至Trizol處，吸取Trizol，加入EP管。

 

4、加入Trizol---- 1 點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上（槍頭為藍色）；3點擊微量吸液器，拖動至Trizol處，點擊Trizol（槍頭內顯示吸取1ml紅色液體）；4拖動微量吸液器至勻漿瓶處，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，微量吸液器回到吸液架上。

    實驗提示：選擇勻漿機；拖動勻漿瓶至勻漿機；點擊勻漿機，勻漿兩次，至勻漿瓶內液體變為均一液體。

 

    5、勻漿----

①    動畫顯示逆時針擰松電機套下端連接螺紋（不用全部擰下），插入1ml勻漿杵子后順時針擰緊（如插入較緊時可邊插邊用手往上擰）。文本框顯示“擰松電機套下端連接螺紋（不用全部擰下），插入1ml勻漿杵子后擰緊（如插入較緊時可邊插邊用手往上擰）”

②    將1ml勻漿瓶夾在試管夾上，對好中心，握住手柄上下試動，至完全對直，再把瓶子夾緊（動畫顯示紅色手柄下拉，勻漿杵子伸入勻漿瓶內，瓶子夾緊后自動恢復）

③    點擊冰盒，拖動到勻漿瓶底部，打開冰盒蓋，使勻漿瓶底部接觸冰。（文本框顯示“加冰浴防止溫度升高使組織失活”） 冰盒 開蓋后里面的冰

④    打開電源開關，把調速調至最小，右手把握控制手柄，

運動杵子至瓶口配合處，調節調速旋扭至所要的速度。即開始勻漿，控制手柄向下運動至瓶底部（不能太用力），再往上運動至與瓶配合處，往復運動至成紅色均一液體。

       ⑤ 勻漿機回到原位置，勻漿瓶仍位于冰盒中，將勻漿瓶內液體倒入1.5ml離心管內，離心管置于冰盒內，勻漿瓶自動消失。

 

文本框顯示：

“實驗注意：1、電動玻璃勻漿機嚴禁在勻漿杵子未放入勻漿器內時懸轉，及無放入組織、液體等空瓶研磨。

2、      如使用中由于負載過大（往往運動過快）發生卡住時，手柄應速向上運動但勻漿杵子不脫離液面。

3、      勻漿要徹底，如一次勻漿不徹底，需再進行一次”

 

          實驗提示：點擊EP管，拖出冰盒，點擊計時器，室溫下靜置5分鐘。

實驗提示：靜置使細胞充分裂解，核蛋白中核酸與蛋白解離。

 

     6、靜置---- 1點擊EP管，拖動EP管至冰盒外，冰盒回到原位；2點擊計時器，拖動計時器至操作臺中央；3再次點擊計時器，開始計時（音樂出現倒計時聲音，說明框顯示“室溫靜置5分鐘”，持續時間3秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計時聲音停止，計時器退回原位置,冰盒移動至操作臺中央，EP管自動至冰盒內。

        實驗提示: 點擊微量吸液器，加入槍頭，吸取0.2ml氯仿。

 

 7、加入氯仿----點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取0.2ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.2ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動至氯仿處，點擊氯仿（槍頭內顯示吸取0.2ml液體；實驗注意：必需按總體積的1/5加入）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到吸液架上。

         實驗注意：氯仿的作用：1、促進有機相和水相的分離；2、去除上清中痕量的酚。

實驗提示：劇烈振蕩

 

8、振蕩---- 1點擊EP管（說明框內顯示：劇烈震蕩15s。EP管上下顛倒混勻振蕩，3秒鐘后停止，重新位于冰盒內）

     實驗提示：靜置10分鐘

 

      9、靜置---- 1點擊計時器，拖動計時器至操作臺中央；3再次點擊計時器，開始計時（音樂出現倒計時聲音，說明框顯示“靜置10分鐘”，持續時間5秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計時聲音停止，計時器退回原位置。

      實驗提示：點擊離心機，配平，開始離心

 

 10、離心---- 1點擊離心機，拖動離心機至操作臺中央，離心機蓋子自動打開，其內可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進，放置正確后，離心機蓋子自動關閉）；3提示框出現：“選擇溫度______℃”，“選擇轉速--______g”，“選擇時間______min”，實驗提示分別顯示“4℃、12000g、15min”，若提示框內填寫正確，提示框自動消失；若任何一項填寫錯誤，提示框持續存在；4點擊離心機，開始離心，畫面停頓5秒鐘后，離心機蓋子自動打開（說明框顯示“離心結束”），EP管自動出現在操作臺中央（EP管內液體分為3層：上層無色透明液體，約0.5ml，鼠標置于該液體層，說明框內顯示：“水相”，約3秒鐘后說明框隱去；中間白色不透明液體，約0.1ml，鼠標置于該液體層，說明框內顯示：“蛋白變性層”，約3秒鐘后說明框隱去；下層為紅色不透明液體，約0.6ml，鼠標置于該液體層，說明框內顯示：“有機相”，約3秒鐘后說明框隱去；），離心機蓋子蓋上，回到原位。

    實驗提示：選擇新的EP管，點擊微量吸液器，裝好槍頭，轉移水相液體至新的EP管內。

 

11、轉移---- 1點擊操作臺左側另外一只新EP管，并拖動至操作臺中央，EP管蓋子自動打開；2點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取水相液體”，3秒鐘后隱去）；3點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.5ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；拖動微量吸液器至原EP管旁，原EP管蓋子自動打開；4微量吸液器伸入原EP管水相液體底層（實驗注意提示：“不要碰到蛋白變性層”，），點擊微量吸液器吸取0.5ml液體，拖動微量吸液器至新EP管內，再次點擊微量吸液器，槍頭內液體注入新EP管內；5重復步驟4。6原EP管蓋子自動蓋上，自動轉移至垃圾桶內；微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置；新EP管位于操作臺中央。

     實驗提示：用微量吸液器加入等體積異丙醇。

 

12、加入異丙醇-----1點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取0.5ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.5ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動至異丙醇處，點擊異丙醇（槍頭內顯示吸取0.5ml無色透明液體；實驗注意：加入等體積異丙醇）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

        實驗注意：異丙醇的作用：沉淀RNA

實驗提示：溫和顛倒混勻

 

13、混勻---- 1點擊EP管（說明框內顯示：溫和顛倒混勻。3秒鐘后停止）

     實驗提示：室溫靜置10分鐘

 

14、靜置---- 1點擊計時器，拖動計時器至操作臺中央；3再次點擊計時器，開始計時（音樂出現倒計時聲音，說明框顯示“室溫靜置10分鐘”，持續時間5秒鐘后隱去），說明框隱去后倒計時聲音停止，計時器退回原位置, EP管位于操作臺中央。

    實驗提示：離心10分鐘

 

15、離心---- 1點擊離心機，拖動離心機至操作臺中央，離心機蓋子自動打開，其內可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進，放置正確后，離心機蓋子自動關閉）；3提示框出現：“選擇溫度______℃”，“選擇轉速--______g”，“選擇時間______min”，實驗提示分別顯示“4℃、12000g、10min”，若提示框內填寫正確，提示框自動消失；若任何一項填寫錯誤，提示框持續存在；4點擊離心機，開始離心，畫面停頓3秒鐘后，離心機蓋子自動打開（說明框顯示“離心結束”），EP管自動出現在操作臺中央（EP管內液體為無色透明液體，EP管底部可見一小塊白色固體物質），離心機蓋子蓋上，回到原位。

     實驗提示：棄去上清

 

16、棄上清----- 1 點擊EP管，EP管蓋子打開，同時鼠標變為戴一次性手套的手的形狀；2手抓住EP管，EP管自動緩慢傾斜，將其內液體倒入垃圾桶內（音樂出現倒水的聲音，過程持續3秒鐘）；3EP管復位，內無液體，底部仍可見白色固體物質，EP管蓋子保持打開。

     實驗提示：加入1ml冰乙醇

 

17、加入冰乙醇 ---- 1點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ml液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動至冰乙醇處，點擊異丙醇（槍頭內顯示吸取1ml無色透明液體；說明框顯示：乙醇已預冷）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到吸液器架上。

       實驗注意：冰乙醇的作用：脫水、除鹽。

       實驗提示：離心

 

18、離心---- 1點擊離心機，拖動離心機至操作臺中央，離心機蓋子自動打開，其內可見已放置一配平管（說明框顯示“配平管”，持續3秒鐘后隱去）；2拖動EP管至配平管對面（其余孔不能放進，放置正確后，離心機蓋子自動關閉）；3提示框出現：“選擇溫度______℃”，“選擇轉速--______g”，“選擇時間______min”，實驗提示分別顯示“4℃、7500g、5min”，若提示框內填寫正確，提示框自動消失；若任何一項填寫錯誤，提示框持續存在；4點擊離心機，開始離心，畫面停頓3秒鐘后，離心機蓋子自動打開（說明框顯示“離心結束”），EP管自動出現在操作臺中央（EP管內液體為無色透明液體，EP管底部可見一小塊白色固體物質），離心機蓋子蓋上，回到原位。

        實驗提示：棄上清

 

19、棄上清--- 同步驟16

        實驗提示：空氣干燥5-10分鐘

 

20、空氣干燥---- 1 畫面停頓5s鐘，說明框顯示“空氣干燥10min”。

       實驗注意：空氣干燥的作用，使乙醇揮發。

       實驗提示：加入DEPC水，溶解。

 

21、加入DEPC水---- 1點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取50ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“0.1ml槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動至DEPC水處，點擊（槍頭內顯示吸取無色透明液體；說明框顯示：1%DEPC水）；4拖動微量吸液器至EP管處，EP管蓋子打開，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，EP管底部白色物質逐漸消失，變為無色透明液體；微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

       實驗注意：怎么還不溶？55-60℃水浴可助溶，但時間需控制在10分鐘以內。

            實驗注意：提取的總RNA置于4℃或冰浴中，立即用于下游實驗，或立即置于-80℃冰箱保存。但無論采用何種方法提取和保存的RNA，都往往會被很快降解，因而建議避免提取RNA后保存。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【左側】：電泳槽、電泳儀、紫外燈、電子天平（內有稱量紙一張）、微波爐、小藥勺、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、置冰盒中EP管（2只，其中一只內含有少量無色透明液體，鼠標箭頭放上，說明框顯示：“已提取的總RNA”）、塑料薄膜、三角燒瓶、50ml量筒

   【右側】：瓊脂糖（白色粉末）、加樣緩沖液（藍色）、溴乙錠*（桔紅色）

            實驗注意：溴乙錠【Ethidium Bromide，EB】：是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。EB是強的變性劑，具有致癌性，操作時必須戴手套?。。?由于EP具有毒性，實驗結束后，應對含有EB的溶液進行凈化處理?。。。?！你知道什么叫凈化處理嗎

   【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣

   【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標記）

   【界面按鈕設計】：實驗注意：有內容時自動顯示

                    實驗提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示

                    重新操作：返回到上一步結束

退出實驗：回到本步驟界面

退出運行：回到首頁

關閉音樂：實驗開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關閉音樂

      實驗提示：點擊電子天平，點擊藥勺，稱取瓊脂糖0.25g。

1、   稱取瓊脂糖 ----- 1點擊電子天平，拖動至操作臺中央，電子天平拉門自動打開，可見托盤上已有濾紙一張；2點擊藥勺，并拖動至瓊脂糖處；3點擊藥勺（動畫演示藥勺挖取瓊脂糖若干），并拖動至電子天平內（動畫演示藥勺傾斜，瓊脂糖落入天平內稱量紙上），藥勺回原位，電子天平門關上，說明框顯示：“0.3g瓊脂糖”，3秒鐘后濾紙連同瓊脂糖自動位于操作臺桌面上，電子天平回到原位。

           實驗提示：點擊量筒，量取1×TAE電泳緩沖液25ml。

 

2、   量取電泳緩沖液----- 1點擊量筒，拖動至操作臺中央；2點擊裝有電泳緩沖液的試劑瓶，試劑瓶蓋子自動打開，鼠標變為手的形狀，移動“手”，抓住試劑瓶，將其內的液體傾倒入量筒內（音樂出現倒水的聲音，說明框顯示“量取25ml液體”，3秒鐘后試劑瓶回到原位，蓋子蓋上，量筒內顯示25ml液體，鼠標變為正常形狀）。

           實驗提示：點擊三角燒瓶，將瓊脂糖及量好的電泳緩沖液倒入燒瓶內，并使用微量吸液器，加入1.25ulEB（溴乙錠），于微波爐內加熱，溶解瓊脂糖。

 

3、   溶解瓊脂糖----- 1點擊三角燒瓶，并拖動至操作臺中央；2點擊放有瓊脂糖的濾紙，鼠標變為手的形狀，抓住瓊脂糖濾紙，將瓊脂糖倒入三角燒瓶內；3“手”抓住量筒，將量筒內液體倒入三角燒瓶（音樂出現倒水的聲音），3秒鐘后液體倒完，鼠標變回原來的形狀，量筒回到原位置，濾紙回到垃圾桶內；4點擊微波爐，并拖動至桌面中央，微波爐蓋子打開； 5點擊三角燒瓶，鼠標變為手的模樣，抓住三角燒瓶，移動至微波爐內，三角燒瓶口自動出現一蓋子，微波爐蓋子關閉； 6點擊微波爐，說明框顯示“溶解瓊脂糖”，瓊脂糖顆粒逐漸溶解，變為無色透明液體，持續約30秒鐘，微波爐蓋子打開。實驗注意：小心！不要使瓊脂糖滿溢至燒瓶外！ 7點擊微波爐內的三角燒瓶，鼠標變為一只白色工作手套狀，自動拿起三角燒瓶，放置于操作臺桌面上，畫面停頓3秒鐘（說明框顯示：冷卻至大約60℃，不要冷卻時間過長，避免瓊脂糖凝固）；8點擊微量吸液器，并拖動至操作臺中央，點擊微量吸液器槍頭，槍頭裝至微量吸液器上；拖動微量吸液器至溴已錠處，說明框顯示“有毒，小心操作，并出現一骷髏頭畫面”，3秒鐘后消失；9點擊微量吸液器，動畫顯示淡紅色液體吸入槍頭的畫面，說明框顯示“吸取1.25ul溴已錠”，3秒鐘后消失；10拖動微量移液器至三角燒瓶內，燒瓶蓋子自動至垃圾桶，畫面顯示液體注入到瓶內的畫面，槍頭自動到垃圾桶，微量吸液器回到移液架。

        實驗提示：將加樣梳放置于膠板上，將溶解后的瓊脂糖倒入膠板內，待瓊脂糖凝膠凝固后拔出點樣梳。

        實驗注意：凝膠顆粒必須完全溶解【圖示瓊脂糖完全溶解和部分溶解對實驗結果影響的圖】

 

4、   澆板----- 1點擊膠板，并拖動至操作臺中央；2點擊點樣梳，點樣梳自動架至膠板一端，說明框顯示“齒梳的底部離膠板平面的距離為0.5-1mm”；3點擊三角燒瓶，鼠標變為戴手套手的形狀，抓住三角瓶，三角燒瓶緩慢傾倒，液體注入膠板內，膠板內液體逐漸增加（畫面要有液體為稍粘稠的感覺），說明框內顯示“注意避免氣泡”，3秒鐘后說明框隱去，液體倒完，鼠標變為原形狀，三角燒瓶回到原位置；4膠板內的瓊脂糖膠在室溫逐漸凝固成半透明的乳白色的固體（約3秒鐘），點擊點樣梳，點樣梳回到原位，畫面顯示膠板內的瓊脂糖為乳白色半透明的固體，一端可見點樣孔。

            實驗提示：點擊并拖動電泳槽至操作臺中央，將膠板小心放入電泳槽內。

 

5、   準備電泳槽 ----- 1點擊電泳槽，并拖動電泳槽至操作臺中央，其內可見無色透明液體（說明框顯示：1*TAE電泳緩沖液）；2 點擊膠板，鼠標變為手的形狀，把膠板將其放入電泳槽內（實驗注意顯示：點樣孔一端置電泳槽的陰極）。   

實驗提示：使用微量吸液器，吸取5ul總RNA，點于塑料薄膜上.

 

6、吸取樣品 ---- 1點擊含有RNA的EP管，并拖動至操作臺中央，EP管蓋子打開；2點擊塑料薄膜，拖動至操作臺中央；3點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取5ul總RNA液體”，3秒鐘后隱去）；4點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；5拖動微量吸液器至EP管處，點擊微量吸液器（出現EP管內含有總RNA的液體吸入槍頭內的畫面）；6拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點擊微量吸液器，吸液器內液體滴入到塑料薄膜上（液體為一個小水滴狀）；7EP管蓋子自動蓋上，微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到移液架上。

實驗提示：使用微量吸液器吸取6×上樣緩沖液（Loading buffer）1ul，滴入塑料薄膜上的總RNA液滴中，反復吸取幾次，混勻，避免氣泡出。

 

7、吸取上樣緩沖液---- 1點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取1ul液體”，3秒鐘后隱去）；2點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3拖動微量吸液器至上樣緩沖液處（藍色），點擊微量吸液器（出現EP管內液體吸入槍頭內的畫面）；4拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點擊微量吸液器，吸液器內液體被打到塑料薄膜上的總RNA的液滴內（液體為一個小水滴狀），反復吸取液體幾次，混勻，液體變為均勻淡藍色；5微量吸液器槍頭自動至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

      實驗提示：點擊電泳槽，將塑料薄膜上的液體加入到電泳槽上的凹槽內。

 

8、上樣 ---- 1點擊電泳槽，并拖動至操作臺中央（電泳槽內靠近陰極側可見一排點樣孔）；2點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），槍頭加入到微量吸液器上；3拖動微量吸液器至塑料薄膜處，點擊塑料薄膜上的液體（出現塑料薄膜上液體吸入槍頭的畫面）；4拖動微量吸液器至凝膠板上的點樣孔處，點擊微量吸液器（出現液體注入凝膠孔內的畫面，液體為淡藍色的液體）。

        實驗提示：點擊電泳儀，連接正負極，開始電泳。

 

9、電泳 ----- 1點擊電泳儀，電泳儀移動至操作臺中央；2點擊電泳槽上的“陰極”顯示扭，鏈接到電泳儀的“陰極”（出現黑色導線鏈接兩端的畫面），點擊電泳槽“陽極”顯示扭，鏈接到電泳儀的“陽極”（出現紅色導線鏈接兩端的畫面）；2持續點擊電泳儀上“電壓選擇”按鈕，電泳儀顯示屏上電壓從“50V”快速升高到“100v”；持續點擊電泳儀上“時間選擇”按鈕，電泳儀顯示屏上時間從“10min”快速升高到“30min”；點擊電泳儀上“開始”按鈕，說明框顯示“開始電泳”，畫面顯示電泳儀陰極不斷出現很多微小氣泡，藍色液體逐漸向陽極移動（畫面持續5秒鐘）；3說明框顯示“30分鐘后”，藍色液體移動至瓊脂糖凝膠的中間。

        實驗提示：點擊紫外分析儀，觀察結果。

 

10、觀察結果---- 1點擊紫外分析儀，紫外分析儀自動移動至操作臺中央；2點擊電泳槽，拖動瓊脂糖凝膠至紫外分析儀中的平板上。電泳儀、電泳槽回到原位；3點擊紫外分析儀，觀察結果，畫面顯示“三條帶”，說明框顯示“28s ，18s，5sRNA”。

實驗提示：準備分光光度計分析RNA純度，點擊EP管，稀釋RNA。

 

    11、準備EP管----點擊新的EP管，并拖動至工作臺中央的冰盒內（EP管外顯示刻度0.5ml，1.0ml，鼠標置于EP管上，說明框內顯示“1.5mlEP管”，3秒鐘后隱去）。

實驗提示：加入DEPC水98ul

 

12、加入DEPC水98ul---- 1 點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取98ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“100ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動DEPC水處，點擊DEPC水（槍頭內顯示吸取98ul白色液體）；4拖動微量吸液器至EP管處，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。

實驗提示：加入RNA2ul

 

    13、加入RNA2ul ---- 1 點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取2ul液體”，3秒鐘后隱去）；2 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；3點擊微量吸液器，拖動RNA處，點擊RNA水（槍頭內顯示吸取2ul白色液體）；4拖動微量吸液器至EP管處，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。

 實驗提示：將稀釋的RNA加入比色皿中

 

     14、將稀釋的RNA加入比色皿中----①點擊比色皿，并拖動至工作臺中央的冰盒內，② 點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取100ul液體”，3秒鐘后隱去）；③ 點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“100ul槍頭”，3秒鐘后隱去），加入到微量吸液器上；④點擊微量吸液器，拖動稀釋的RNA處，點擊稀釋的RNA水處（槍頭內顯示吸取100ul白色液體）；⑤拖動微量吸液器至EP管處，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到原位置。

實驗提示：點擊分光光度計，分析RNA純度

 

15、點擊分光光度計，分析RNA純度----1點擊分光光度計，拖動分光光度計自動移動至操作臺中央，分光光度計蓋子自動打開；2將比色皿加入分光度計內，分光光度計蓋子自動合上；3點擊“開始分析”，觀察結果，畫面顯示“A260/A280=2.0”。

 

實驗注意：通過電泳的結果觀察分析提取的總RNA有無降解：完整的RNA的電泳可明顯觀察到28s和18s兩條帶，并且28s大約是18s的兩倍寬。若兩條帶不明顯，則說明RNA部分降解。

RNA的純度確定：A260/A280≈2.0，如果A260/A230<2，除鹽不充分。

計算RNA的濃度：RNA原液的濃度=（A260-A230）*稀釋倍數*40（ng/ul）

 

  【左側】：PCR儀、盛有冰的容器（不帶蓋）、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管

   【右側】：總RNA、MgCl₂(25mM)（無色液體，水滴狀表示）、Reverse transcription 10*Buffer（白色透明波浪狀液體）、dNTP Mixture(10mM)（A、T、G、C）、RNase Inhibitor（白色球狀液體）、Random 9 mers（單鏈RNA狀）、Reverse Transcriptase（   狀）、DEPC水（水滴狀）

   【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣

   【界面按鈕設計】：實驗注意：有內容時自動顯示

                    實驗提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示

                    重新操作：返回到上一步結束

退出實驗：回到本步驟界面

退出運行：回到首頁

關閉音樂：實驗開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關閉音樂

       實驗提示：將2ul總RNA加入EP管，點擊PCR儀，70℃孵育10分鐘。

1、 孵育 ---- 1點擊EP管， EP管蓋子自動打開，EP管自動移動至桌面中央；2點擊微量吸液器（說明框顯示“吸取2ul液體”，3秒鐘后隱去）；3點擊裝有消毒槍頭的塑料盒（說明框顯示“10ul槍頭”，3秒鐘后隱去），槍頭自動加入到微量吸液器上（槍頭為黃色）；4點擊微量吸液器，拖動至總RNA處，點擊總RNA（槍頭內顯示吸取2ul無色透明液體）；5拖動微量吸液器至EP管處，點擊微量吸液器（出現槍頭內液體注入EP管內的畫面），液體注入后，EP管蓋子蓋上，微量吸液器回到移液架上，槍頭自動至垃圾桶內;6點擊PCR儀，并拖動至操作臺中央，PCR儀蓋子自動打開;7拖動EP管放入PCR儀內,PCR儀蓋子自動蓋上（說明框顯示：孵育：______℃,時間:-_______分鐘;實驗提示:孵育70℃,10分鐘,若填錯,實驗不能繼續）；8說明框顯示:“10分鐘后”，3秒鐘后隱去,PCR儀蓋子自動打開,EP管位于桌面上的冰盒內,PCR儀蓋子關上,PCR儀回到原位。

         實驗注意：去除RNA二級結構。

      實驗提示：將EP管立即拖動至盛有冰的容器內。

 

2、配制反應液----- 1點擊MgCl₂(25mM)，說明框顯示：加入______ul，實驗提示：4ul，若填錯,實驗不能繼續；填寫正確后，MgCl₂(25mM)自動加入EP管內，EP管內液面上升；2點擊Reverse transcription 10*Buffer，說明框顯示：加入______ul，實驗提示：2ul，若填錯,實驗不能繼續；填寫正確后Reverse transcription 10*Buffer自動加入EP管內，EP管內液面上升；3同上依次加入dNTP Mixture(10mM) 2ul、RNase Inhibitor 0.5ul、Random 9 mers 1ul、Reverse Transcriptase 1ul、DEPC水 7.5ul；4加入完成后，EP管蓋子自動蓋上，自動混勻。

實驗注意：以上液體加入不分先后順序，均需使用微量吸液器。

       實驗提示：點擊PCR儀，進行cDNA反應。

 

3、逆轉錄----- 1點擊PCR儀， PCR儀自動移動至操作臺中央，蓋子自動打開;2拖動EP管放入PCR儀內,PCR儀蓋子自動蓋上，冰盒回到原位（說明框顯示：30℃，_______分鐘；42℃，_______分鐘；95℃，_______分鐘；5℃，_______分鐘。實驗提示顯示：10分鐘，15分鐘，5分鐘，5分鐘）。3填寫完畢后，說明框提示：開始運行，5秒鐘后隱去，PCR儀蓋子打開，EP管位于操作臺中央，PCR儀回到原位。

         實驗提示：cDNA制備完成。

         各種溫度設置的作用

 

 

 

 

 

 

 

 

  【左側】：PCR儀、振蕩器、微量取液器、盛有消毒槍頭的塑料盒、EP管

   【右側】：cDNA模板（DNA雙鏈結構樣表示）、MgCl₂(25mM) （無色液體，水滴狀表示）、10*Buffer（白色透明波浪狀液體）、dNTP Mixture(10mM)（AGTC）、Taq酶（   樣，鼠標放上實驗注意：-20℃保存，切勿反復凍融）、Forward引物（白色透明水滴狀液體）、Reverse 引物（白色透明水滴狀液體）、DEPC水（無色水滴狀液體）

   【畫面中央】：工作臺：一塊象征性的平臺，有“工作臺”字樣

   【畫面右下角】：垃圾桶（有骷髏頭圖形標記）

   【界面按鈕設計】：實驗注意：有內容時自動顯示

                    實驗提示：步箭頭放上自動顯示，以后每一步均自動顯示

                    重新操作：返回到上一步結束

退出實驗：回到本步驟界面

退出運行：回到首頁

關閉音樂：實驗開始，背景音樂自動響起。按此鍵，即關閉音樂