圖示 JY99-IIDN超聲波細胞粉碎機

　　1、材料與設備

　　黃精：購于沈陽中街新藥特藥;循環水多用真空泵;HH一6數顯恒溫水浴鍋;光柵分光光度計：山東高密彩虹分析儀器有限公司;電熱鼓風恒溫干燥箱;JY99-IIDN超聲波細胞粉碎機：寧波新芝生物科技股份有限公司。

　　2、實驗方法

　　①多糖粗提品的制備

　　用天平稱取研磨后的黃精碎片100g，80%的乙醇溶液80℃回流提取6h。提取后的黃精碎片于水浴鍋上烘干。

　　②超聲細胞粉碎儀提取黃精多糖

　　準確稱取經乙醇抽提后的黃精碎片30g，放于三角瓶中，加入8倍量的蒸餾水放入超聲細胞破碎儀中，調整工作時間最大為99s，間隔時間1s，工作次數36次。然后開始用超聲波細胞粉碎機進行超聲處理，并逐漸調節工作電壓至最大。超聲處理1 h取出，過濾。向濾液中再加入6倍量的蒸餾水，按同樣的工作參數進行第二次超聲處理，40min后取出，合并兩次濾液。抽濾，除去雜質后將濾液取出按l：l濃縮至30 mL。然后加入3倍量的乙醇進行沉淀，靜置大約1h至上清液與沉淀出現明顯分層后抽濾，在抽濾過程中不斷加入無水乙醇，待所得樣品沉淀徹底干燥后取出。

　　3、精多糖含量的測定

　　采用苯酚一硫酸法測定黃精多糖的含量具體步驟如下：

　　準確稱取葡萄糖4 mg，置于100 mL容量瓶中。然后分別精確吸取0.4、0.6、0.8 1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL。加于標號的試管中，各以蒸餾水補至2.0 mL，然后加入6%苯酚1.0mL及濃硫酸5.0mL。靜置10min搖勻，室溫放置20min以后于490mm測光密度，以2.0mL水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為黃精多糖微克數，縱坐標為光密度值繪制標準曲線。

　　4、結論分析

　　用于各種動植物細胞、病毒細胞、細菌、牙孢及組織超聲波破碎提取法利用超聲波其強大的空化效果和許多次級效應如：機械震動，擊碎乳化，擴散等可以擊碎細胞壁釋放物質，常用于各種動植物細胞、病毒細胞、細菌、芽孢及組織的破碎。本研究采用超聲波細胞粉碎機提取黃精多糖，獲得的多糖同水煎法、稀堿浸提法相比顏色淺，雜質少，純度高，是提取黃精多糖的一種有效方法。